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                        徠卡高壓冷凍儀的這些知識值得我們學習

                        更新時間:2022-05-20      點擊次數:587
                          冷凍電鏡技術簡化,并將其應用在生物分子成像方向,打破了長期以來解析蛋白必須依靠傳統X射線晶體學(X-raycrystallography),核磁共振(NMR)的手段,使我們在近期內很有可能獲得原子級別分辨率下的生命復雜機制的詳細圖像。
                         
                          徠卡高壓冷凍儀是通過液氮制冷,通過空氣壓縮機提供壓力來源,通過物理原理可使局部壓強達到2100拔,從而實現對含水樣本的高壓冷凍固定, 冷凍固定后樣品經后續處理(冷凍替代/常溫超薄切片,冷凍超薄切片或冷凍斷裂等)供電子顯微鏡觀測。能在毫秒級別內大程度地保存樣品生活狀態的原始真實信息,蛋白質結構、酶/抗原活性無變化,可溶性離子及小分子得到有效固定等等,有效避免了常規化學固定帶來的假象。除了可以結合冷凍切片,完成CEMOVIS的工作外,它還可以結合冷凍斷裂,冷凍替代等來觀察樣品的內部超微結構或進行免疫學的相關工作。除此之外,它還可以結合光刺激和電刺激,為神經生理學家打開了一扇新的大門。
                         
                          徠卡高壓冷凍儀的制備程序可為兩類:
                          1.無溶液制備法:包括取材、快速冷蹤、冷凍替代、切片、干燥、染色或不染色、鏡檢等幾個步驟。主要用于可溶性物質的放射白顯影和X射線微區分析。
                          2.固定樣品制備法:包括取材、樣品包埋或不包埋、冷凍保護處IR、快速冷凍切片、染包及鏡檢等步驟。適用于進行形態學、細胞化學和免疫細胞化學研究。
                         
                          徠卡高壓冷凍儀的主要技術路線是: 通過冷凍制樣技術(高壓冷凍,保存樣品原始的亞細胞結構信息),制備得到冷凍超薄切片(或通過投入冷凍技術冷凍樣品),之后借助冷凍光鏡觀察熒光標記位置,記錄感興趣的位置,然后在冷凍TEM中實現原位電鏡觀察,從而實現光鏡電鏡聯用技術。
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