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                        激光顯微鏡的優勢

                        更新時間:2023-01-04      點擊次數:529

                             激光顯微鏡與傳統寬場顯微鏡相比,具有高清晰度、高分辨率、高靈敏度等特點,在生物醫學領域應用廣泛,成為了該領域重要的成像工具。為什么共聚焦能得到如此多的寵愛,它又有哪些優勢呢?本文列舉了三方面來論述共聚焦的優勢。

                          只收集焦平面上的信號,使圖像由模糊變清晰

                          樣品比較厚的時候,普通寬場熒光顯微鏡只能夠觀察到整體的樣品結構,而共聚焦顯微鏡卻可以展現樣品輪廓及內部結構。

                          那么共聚焦顯微鏡是如何實現這一優勢的呢?這就要歸功于共聚焦的關鍵硬件—針孔(pinhole),如圖二所示,它是檢測器前面的一個小孔,放置在與樣品焦面共軛的光學平面上。當激發光照射樣品時,焦面和非焦平面上的樣品區域都會被激發而產生熒光信號,調節合適的針孔大?。ㄍǔ? Au),使焦面上的熒光信號(綠色虛線)可以通過針孔到達檢測器,而非焦平面的熒光信號(紅色和藍色虛線)不能通過針孔到達檢測器。通過增加硬件針孔,使共聚焦在不改變普通熒光顯微鏡的制片方法的前提下,得到了清晰的高質量圖像。

                          可連續獲取不同焦平面的信號,實現三維重組

                          由于針孔的存在,我們能夠只獲取到焦平面上的信號,得到高分辨率的二維圖像。連續調節Z軸位置,就能夠得到不同Z軸位置的二維圖像,獲得一系列連續的“光學切片"圖像。獲得這些光學切片后,可使用儀器軟件配備的3D模塊進行三維圖像的重組,構建出清晰的3D圖像。這種無損傷的、連續的光學切片圖像的采集,實現了“細胞CT"的功能。

                          應用于共定位(Co-localization)研究

                          共定位結果的精準度與圖像的分辨率密切相關,所以我們在進行共定位實驗時需要選擇更高分辨率的成像方式。共聚焦顯微鏡相比于傳統顯微鏡以其高分辨率的優勢,成為共定位研究的得力工具。

                          由于衍射極限的存在,激光顯微鏡常規共聚焦光學分辨率在200nm左右,當我們需要觀察大于200nm的結構時,共聚焦就能夠準確判斷其共定位程度。如果需要進行共定位分析,可以選用共聚焦軟件中配備的共定位分析模塊。


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